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高速離心機的分離方法,有哪幾種?

信息來源: 長沙湘銳離心機有限公司     發布時間:2018-08-20    閱讀:

  A.差速離心:逐次增加離心力,每次可沉降樣品溶液中的一些組份。

  差速離心是一種最常用的方法。在這種方法中,離心管在開始時裝滿了均一的樣品溶液。通過在一定速度下一定時間的離心后,就可得到兩個部份:沉淀和上清液。

  通常在***次離心時把大部分不需要的大粒子沉降去掉。這時所需的組份大部分仍留在上清液中。然后將收集到的上清液以更高速度離心,把所需的粒子沉積下來。離心的時間要選擇得當,使大部份不需要的更小的粒子仍留在上清液中。對于得到的沉淀和上清液可以進行進一步的離心,直到達到所需要的分離純度為止。

  差速離心的特點是操作簡單,但分離純度不高。

  B.密度梯度離心法:可以同時使樣品中幾個或全部組份分離,具有很好的分辨率。

  1)速率區帶法(ratezonal):

  根據樣品中不同粒子所具有的不同的尺寸大小及沉降速度(S)。大致步驟如下:

  在離心管中裝入密度梯度溶液,溶液的密度從離心管頂部至底部逐漸增加(正梯度)。

  將所需分離的樣品小心地加至密度梯度溶液的頂部。樣品在梯度溶液表面形成一負梯度。

  由于不同大小的粒子在離心力作用下,在梯度中移動的速度不一樣,所以經過離心后會形成幾條分開的樣品區帶。

  注意:樣品粒子的密度必須大于梯度液注中任一點的密度。離心過程必須在區帶到達管子底部前停止。

  2)等密度離心法(isopycnic):

  根據粒子的不同密度來分離。離心過程中,粒子會移至與它本身密度相同的地方形成區帶。

  密度樣度的選擇要使梯度的范圍包括所有待分離粒子的密度。樣品可以在密度梯度液粒上面或均勻分布在密度梯度中。經離心后,樣品粒子達到它們的平衡點。注意:平衡后粒子的分離完全由其密度決定,與時間無關,此時再改變離心轉速,只能改變區帶的相對位置。

  (3)、加樣方法與加樣量:

  將樣品加到梯度液柱上,針尖和離心管成45-60°角度,慢慢地將樣品沿管壁流到液面上去,對于DNA一類易斷的脆弱樣品,應該用孔徑較大的移液管代替針頭,以避免剪切力對樣品的切割作用。樣品濃度是梯度柱最小密度的1/10(W/W)。

  (4)、分離區帶的回收及檢測

  高速離心機離心后所形成的區帶樣品的回收方法基本有四種:

  a.穿刺法

  穿刺離心管底部,使梯度溶液滴出,將一具有合適閥門的蓋帽放在離心管頂,可控制滴出速度。

  b.虹吸法:

  將一毛細管輕輕插入管底,盡量防止梯度抖動,用微量泵逐漸滴取,以一定量滴數或體積部分收取。

  c.加壓法:

  通過一針管將高密度的液體泵入到梯度離心管的底部,部分收集換出的溶液。

  d.切割法:

  采用專用的切割刀切割所需區帶。

  區帶檢測:

  所謂區帶檢測,實際上是對水平轉子或角轉子和垂直轉子離心管中的分離物質所做的監測,通常只是測量在260或280mm時長的吸收值,以決定梯度中的核酸或蛋白的整個分布,這個操作通常稱之為在線(online)監測。

  長沙湘銳離心機有限公司位于中國離心機之鄉長沙,公司由3位離心機行業專家共同投資500萬人民幣組建,目前公司專業生產,高速離心機,醫用離心機,臺式離心機,冷凍離心機,低速離心機,全自動脫帽離心機,臺式高速離心機,大容量離心機,美容離心機,石油離心機,制藥離心機。聯系方式:13973153389

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